VEGF重組質(zhì)粒pcDNA/V的構(gòu)建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表達
構(gòu)建人血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF165)真核表達載體,并研究其在細胞水平和大鼠急性心肌梗死動物模型中的表達.利用RT-PCR方法,從人扁桃體組織中擴增人VEGF165基因,構(gòu)建真核表達載體pcDNA/V.應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù),將pcDNA/V轉(zhuǎn)染至人胚腎細胞(293細胞)中,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達的重組質(zhì)粒細胞克隆.ELISA、Western blot檢測證實重組質(zhì)粒pcDNA/V能在293細胞中高效表達外源VEGF基因,雞胚絨毛尿囊膜血管生成實驗證實表達產(chǎn)物具有促血管生成的活性.進一步的體內(nèi)表達研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,將重組質(zhì)粒pcDNA/V、空質(zhì)粒pcDNA3.1(+)分三點注射于梗死交界處心肌內(nèi),四周后取材.經(jīng)免疫組化染色檢測,pcDNA/V組在梗死交界區(qū)有VEGF陽性表達;電鏡觀察顯示,pcDNA/V組在梗死交界處心肌細胞間有大量毛細血管內(nèi)皮細胞增生.實驗結(jié)果表明:成功克隆了人VEGF165基因,構(gòu)建了其真核表達載體.體內(nèi)、外表達研究證實重組質(zhì)粒的表達產(chǎn)物具有促血管生成的生物學活性,為VEGF基因治療缺血性心肌病的研究提供實驗基礎(chǔ).
作 者： 王雅梅 劉冰 孫麗翠 閆豫東 司楊 祁雅慧 WANG Ya-Mei LIU Bing SUN Li-Cui YAN Yu-Dong SI Yang Qi Ya-Hui 作者單位： 首都醫(yī)科大學實驗中心,北京,100054 刊 名： 生物工程學報 ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2006 22(2) 分類號： Q785 關(guān)鍵詞： 血管內(nèi)皮細胞生長因子 真核表達載體 基因表達 心肌梗死【VEGF重組質(zhì)粒pcDNA/V的構(gòu)建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表達】相關(guān)文章：
發(fā)生點突變的pCDNA3.1(+)質(zhì)粒的構(gòu)建04-27
真核表達質(zhì)粒PcDNA3.1(+)-帶有Vasostatin自身信號肽的Calreticulin(120～180 aa)的構(gòu)建及其在COS-7細胞中的表達04-26
雞CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建04-26
表達IBDV VP2融合蛋白的重組MDV的構(gòu)建及其免疫特性04-26
維甲酸受體β基因RNAi表達質(zhì)粒的構(gòu)建及其對A549細胞增殖和分化的影響04-27
大腸癌相關(guān)基因PGDH原核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及表達04-26
重組質(zhì)粒pYES-GFP mRNA在動物細胞中表達的研究04-27
博爾納病病毒pEGFP-p24基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定04-27